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 Síndrome X Frágil

Asuraen

El Síndrome X Frágil (FXS) o de Martin-Bell se caracteriza por la expansión del triplete de nucleótidos CGG en la región 5’UTR del gen FMR1 (Fragil X Mental Retardation 1), situado en la región Xq27.3 del cromosoma X. Este trastorno es la forma más común de retraso mental hereditario, afectando a uno de cada 4000 varones y a una de cada 8000 mujeres de un amplio rango de edad. Se considera también la causa genética más frecuente de autismo.

X Fragil
Los individuos con alelos normales (entre 5 y 44 repeticiones de CGG) o intermedios (entre 45 y 54 repeticiones) no presentan ninguna sintomatología. Los individuos con alelos en estado de premutación (de 55 a 200 repeticiones) pueden desarrollar dos enfermedades asociadas a X frágil; Síndrome con temblor/ataxia (FXTAS) e Insuficiencia ovárica primaria (FXPOI), mientras que aquellos con mutación completa (más de 200 repeticiones) sufren el cuadro clásico de X Frágil. En este último caso se produce la hipermetilación de la isla CpG adyacente al gen FMR1 y como consecuencia la inactivación del mismo. La inhibición de la transcripción de la proteína codificada por el gen (FMRP) es la causante de las manifestaciones clínicas de la enfermedad.


Debido a esta correlación entre el patrón molecular del gen y las distintas situaciones clínicas el estudio de la zona repetitiva (CGG)n y del grado de metilación en FMR1 resulta muy útil para determinar la herencia de la enfermedad dentro de una familia y para establecer un diagnóstico de todas las clases de individuos relacionados con el cromosoma X frágil.



kits asuragen x frÁgil
AmplideX™ FMR1 PCR (CE-IVD)
AmplideX® FMR1 mPCR  (Metilación)
AmplideX™ FMR1 PCR Reagents (CE-IVD)
 Características del test
El sistema Amplidex™ FMR1 PCR Reagents de Asuragen permite la detección y cuantificación del número de repeticiones CGG en el gen FMR1. Las principales innovaciones del producto se basan en la combinación óptima de primers específicos del gen, un buffer de amplificación para secuencias ricas en GC y condiciones optimizadas para la reacción de PCR.

Constituye una alternativa eficaz a las limitaciones de los métodos actuales de diagnóstico, Southern blotting y PCR.

Características Amplidex™ FMR1 PCR PCR convencional Southern blotting
Duración y manejo de la técnica
Horas. Fácil de usar
Horas. Fácil de usar
Días. Técnica laboriosa
Muestra requerida
2 uL gDNA(10-40 ng/µL
2 uL gDNA(10-40 ng/µL
5-10 µg gDNA
Determinación de repeticiones CGG
• Determinación del número exacto.
• Amplificación optimizada de alelos con más de 1000 CGG
• Determinación del número exacto.
• Amplificación optimizada hasta 300-500 CGG.
• Dificultad de amplificar secuencias grandes y ricas en GC
• Determinación imprecisa del número.
• Detección de fragmentos con más de 1000 CGG
Sensibilidad
• Más sensible que Southern para detectar alelos poco abundantes en mosaico.
• Diferenciación precisa entre mujeres heterocigotas y homocigotas
• Poco sensible para detectar alelos en mosaico.
• Amplificación preferente del alelo más pequeño en mujeres heterocigotas
Poco sensible para detectar alelos en mosaico y mujeres heterocigotas
Información sobre el estado de metilación
Determinación exacta del % de metilación
No proporciona datos sobre la metilación
Estimación del % de metilación
 Protocolo
Los productos de PCR son analizados mediante electroforesis capilar (Genetic Analyzers, polímero POP-7, capilar de 36 o 50 cm), técnica de alta resolución que permite la cuantificación precisa de las repeticiones CGG y la detección de alelos con una repetición CGG de diferencia.


 análisis molecular del gen FMR1



Dos formatos disponibles:

Gene-especific FMR1 PCR: combinación optimizada de primers específicos del gen FMR1 para determinar de forma exacta el tamaño del alelo


Gene-especific FMR1 PCR

 

 

Alta sensibilidad para distinguir alelos con 1 CGG de diferencia


Gene-especific FMR1 PCR

 

 

Alta precisión para determinar el número de repeticiones CGG





CGG Repeat Primed (RP) FMR1 PCR: permite una cuantificación más precisa de los tripletes CGG, resuelve problemas de diferenciación entre mujeres heterocigotas y homocigotas e identifica elementos espaciadores AGG entre las secuencias de repeticiones CGG.


CGG Repeat Primed (RP) FMR1 PCR





Conocimiento de la estructura interna de la región de repeticiones CGG


Gene-especific PCR



Gene-especific PCR



CGG Repeat Primed PCR



CGG Repeat Primed PCR

 Referencia y presentación del kit
Descripción Referencia Presentación
AmplideX® FMR1 PCR 76008 100 reacciones
 Dcoumentación


Ficoll-Hypaque      » Folleto General «

Ficoll-Hypaque      » Protocolo «




Publicaciones


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Webinars


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AmplideX™ FMR1 mPCR

Los reactivos  Amplidex FMR1 mPCR utilizan  una única reacción PCR para resolver el estado de metilación del gen FMR1. Estos reactivos revelan el estado de metilación de cada alelo individual en hombres y mujeres y esto elimina la necesidad de hacer técnicas tan manuales y costosas como el Southern Blot.


 Características del test
  Elimina la necesidad del análisis por Southern Blot.
  Amplifica y detecta los alelos normales, intermedios, premutaciones y mutaciones completas.
  Mide con precisión el porcentaje de metilación para cada alelo FMR1 con  mayor resolución que el análisis de Southern blot.
  Proporciona mayor sensibilidad para la detección de alelos en mosaico de  baja abundancia.
  Incluye controles de digestion y amplificación para asegurar el máximo rendimiento en cada muestra.
  Diseñado para complementar con los reactivos del kit AmplideX® FMR1 PCR.
 Protocolo
X Fragil Asuragen
 Resultados
Asuragen mPCR

  Controles de digestion para controlar la reacción de digestión de cada muestra.

  Los alelos se detectan en los canales de fluorescencia FAM y HEX. Una comparación de las alturas de los picos  en los dos canales se usa para determinar el porcentaje de metilación de cada alelo.

  El estado de metilación observado usando el AmplideX® FMR1 mPCR  kit es concordante con los resultados del Southern Blot, y correlacionan perfectamente con el análisis fenótipico observado.


mPCR Asuragen


  Observed phenotype:† Low functioning female (65 IQ), anxiety, mood swings, and ADHD.

  Observed genotype: Full mutation allele identified using AmplideX® FMR1 PCR Kit and fully methylated status resolved using Amplidex® FMR1 mPCR Kit. The results were concordant with Southern blot and consistent with the observed phenotype.
 Componentes del kit
AmplideX™ FMR1 mPCR
Digestion Reagents Referencia
Digestion Buffer, Control Enzyme (FAM)
Digestion Enzyme (HEX); DNA Control Mix
49442

24 Reactions
PCR Reagents
mPCR GC Rich Amp Buffer; GC Rich Polymerase Mix;
mPCR FAM primers; mPCR HEX Primers
Capillary Electrophoresis Reagents
ROX 1000 Size Ladder
 Dcoumentación


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